Перспективы производства биоаналогов рекомбинантного человеческого гормона роста в Республике Молдова.

Аннотация

В сотрудничестве с ГМФУ «Н.Тестемицану», фармацевтической компанией Balkan Pharmaceuticals и ICGEB был проведен технологический трансфер на этапе масштабирования от лабораторной фазы к пилотной фазе про-цессов создания рабочего банка клеток и выращивания штаммов Pichia pastoris в колбах Эрленмейера. В качестве системы экспрессии для рекомбинантного гормона роста была выбрана Pichia pastoris, имеющая ряд преимуществ по сравнению с другими организмами, включая укладку белка, посттрансляционные изменения в белке и простоту в обращении. Измененный GH1 рекомбинантный ген соматропина человека вводили в геном культуры Pichia pastoris с помощью рестрикции вблизи промотора гена AOX1 в качестве вектора, использовали плазмид pPIC9K. Ген GH1 был активирован промотором гена AOX1, который можно легко индуцировать посредством присутствия метанола в культуральной среде. Затем к модифицированной последовательности добавляли последовательность«препро-альфа-лидер фактора» из Saccharomyces cerevisiae, чтобы полученный соматропин мог секретироваться в культуральную среду. В процессе технологического трансфера изучено влияние выбранных технологических процессов на некоторые параметры получаемого продукта, разработаны Технологические Регламенты для процесса кратковременного и длительного хранения клеток Pichia pastoris и для процесса приготовления инокулята, инокуляции и выращивания P. pastoris с рекомбинантным гормоном роста человека в колбе Эрленмейера. Разработаны Стандартные Операционные Процедуры для процессов создания рабочего банка клеток, определения биологической активности препарата рекомбинантного гормона роста человека in vitro с последующим внедрением в процесс производства биоаналога rhGH на предприятии Balkan Pharmaceuticals ООО.